Phusion DNA Polymerase适用于多种PCR应用,包括常规PCR、长片段扩增
在分子生物学实验中,DNA的完整性和准确性是实验成功的关键。Uracil-DNA Glycosylase(UDG)是一种能够特异性识别并修复DNA中尿嘧啶(U)的酶,广泛应用于PCR反应和其他DNA合成实验中。然而,传统的UDG在反应结束后需要额外的处理步骤来失活酶活性,以防止对后续实验的干扰。热敏感型UDG(Heat-labile UDG)的出现,为这一问题提供了高效的解决方案。特别是来自鳕鱼(Cod)的热敏感型UDG,以其独特的热失活特性和高效性,成为了分子生物学实验中的重要工具。 热敏感型UDG的独特特性 Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) (1U/μl)是一种从鳕鱼中提取并经过工程改造的UDG。与传统的UDG不同,这种酶在高温条件下(通常在95℃)会迅速失活。这一特性使其在PCR反应中具有显著优势。在反应开始前,UDG可以有效去除引物或模板中的尿嘧啶,防止非特异性扩增。而在PCR反应的高温变性步骤中,UDG会自动失活,无需额外的处理步骤,从而简化了实验流程。
DNA Marker VII用于验证质粒酶切后的片段大小,确保酶切反应的完整性,快速估算DNA片段
GTBE电泳缓冲液(1×)是一种专为DNA脉冲场凝胶电泳设计的缓冲液,广泛应用于分子生物学实验中。它由甘氨酸和TBE(Tris-Borate-EDTA)组成,能够提供稳定的电泳环境,特别适用于分离相对较小(小于2000 bp)的DNA片段。产品特性成分:主要由TBE缓冲液、甘氨酸和防腐剂等组成。缓冲能力:缓冲能力较弱,适合分离小于2000 bp的DNA片段。即用型设计:1×浓度,无需稀释,直接使用。稳定性高:室温保存,有效期长达12个月。使用方法制备凝胶:使用1×GTBE缓冲液制备琼脂糖凝胶。加样:将样品加入琼脂糖凝胶的加样孔中。电泳条件:适用于脉冲场凝胶电泳,电泳电压和时间根据实验需求调整。染色与观察:电泳结束后,使用合适的DNA染料(如EB或Goldview)染色,在紫外灯下观察DNA条带。保存与注意事项保存条件:室温保存,开封后尽快使用。个人防护:操作时需佩戴实验服和一次性手套,以确保安全。用途限制:仅供科研使用,不得用于临床诊断或其他非科研用途。
RcView 吖啶橙核酸染料应保存在4°C的避光环境中,以确保其稳定性和荧光强度。
T7 Endonuclease I(T7EI)是一种来源于T7噬菌体的核酸内切酶,能够特异性识别并切割DNA中的错配碱基对、十字型结构DNA、Holliday结构或交叉DNA以及异源双链DNA。这种酶在基因编辑领域,尤其是CRISPR-Cas9技术中,被广泛用于检测基因突变和编辑效率。 功能与特性 错配识别:T7EI能够识别DNA中的不完全配对碱基对,并在错配位点的5'端切割第一、第二或第三个磷酸二酯键。 高特异性:该酶对特定DNA结构具有高度特异性,能够有效区分野生型和突变型DNA。 应用广泛:除了用于基因编辑效果的检测,T7EI还可用于分解四方向交叉DNA、检测或切割异源双链DNA、随机切割线性DNA进行shot-gun克隆。 在CRISPR基因编辑中的应用 在CRISPR-Cas9基因编辑中,T7EI常用于检测目标基因是否成功引入突变。具体步骤如下: PCR扩增:分别以野生型和突变型DNA为模板,扩增包含突变位点的DNA片段。 变性与退火:将PCR产物变性后退火,形成异源双链DNA。 酶切反应:加入T7EI,在37℃下反应15-30分钟,通过琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果。
UDG可快速水解单链或双链DNA中的尿嘧啶释放游离尿嘧啶但对RNA或短于6个碱基的DNA寡聚体无活性
在分子生物学实验中,DNA合成是许多技术的核心,而dNTP/dUTP Mixture (2.5 mM each/5 mM)作为一种特殊的试剂,为DNA合成提供了更多可能性。这种混合液结合了四种脱氧核苷三磷酸(dATP、dCTP、dTTP、dGTP)和脱氧尿苷三磷酸(dUTP),为PCR反应和其他DNA合成实验提供了多功能的支持。 dNTP/dUTP Mixture的独特优势 dNTP/dUTP Mixture (2.5 mM each/5 mM)是一种精心设计的混合液,其中每种dNTP的浓度为2.5 mM,而dUTP的浓度为5 mM。这种独特的配方使其在多种实验中表现出色: PCR反应中的应用:在传统的PCR反应中,dNTPs是DNA合成的基本原料。然而,dUTP的加入为PCR反应提供了额外的功能。例如,某些PCR反应需要引入dUTP来标记DNA,或者在后续实验中利用尿嘧啶糖基化酶(UNG)去除dU,从而实现PCR产物的特异性降解。这种混合液能够满足这些特殊需求,同时保持反应的高效性和特异性。
已成为核酸电泳实验中不可或缺的工具,为科研人员提供了便捷和可靠的实验支持。
phi29 DNA Polymerase 是一种来源于 Bacillus subtilis 噬菌体 phi29 的重组酶,经过基因工程改造后,具有卓越的链置换和持续合成能力。它能够在等温条件下高效扩增DNA,生成长达70 kb的DNA片段。 特性与优势 高持续合成能力:phi29 DNA Polymerase 可以连续合成超过70 kb的DNA片段,无需从模板上解离。 高保真性:具有3′→5′外切酶校正活性,保真性比Taq DNA Polymerase高100倍。 链置换活性:能够高效置换DNA链,适合滚环扩增(RCA)和多重置换扩增(MDA)。 温和反应条件:反应温度通常为37-42℃,适合等温扩增。 应用场景 全基因组扩增(WGA):用于单细胞测序、病原微生物检测和宏基因组研究。 滚环扩增(RCA):生成周期性DNA纳米模板,适用于测序模板制备。 多重置换扩增(MDA):用于无偏扩增全基因组。 高GC含量模板扩增:在NGS测序中,能够提升高GC含量和复杂模板的扩增效率。 使用方法 储存条件:-20℃保存,避免反复冻融。 反应条件:37-42℃孵育1-3小时,65℃加热10分钟失活。
在琼脂糖凝胶电泳中DL2000DNAMarker可作为分子量标准帮助研究人员快速判断DNA片段的长度
在分子生物学领域,DNA聚合酶是PCR技术的核心工具,而Pfu DNA Polymerase因其卓越的高保真性脱颖而出,成为精准基因扩增的首选酶。 Pfu DNA Polymerase是从嗜热菌Pyrococcus furiosus中分离纯化而来的一种耐热DNA聚合酶。与常见的Taq DNA聚合酶相比,Pfu酶最大的优势在于其具有强大的3'到5'外切酶活性,这种活性赋予了Pfu酶校正功能,使其在DNA合成过程中能够及时纠正错误配对的碱基,从而显著提高DNA扩增的准确性。研究表明,Pfu酶的保真度是Taq酶的约7倍,这意味着在扩增长片段DNA或需要高准确性的基因克隆实验中,Pfu酶能够更有效地避免突变的产生。 Pfu DNA Polymerase的耐热性也使其能够适应PCR反应中的高温变性步骤,保证在每个循环中都能稳定地合成DNA。这种耐热性与高保真性相结合,使得Pfu酶在长片段DNA扩增中表现出色。由于其校正功能减少了错误碱基的累积,Pfu酶能够更有效地合成较长的DNA片段,而不会因突变导致扩增失败。
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