在生物体的微观世界里,T3 RNA聚合酶扮演着至关重要的角色。
在生物技术的浩瀚星空中,蛋白AG-微球菌核酸酶(pAG-MNase)犹如一颗冉冉升起的新星,闪耀着独特的光芒。它是一种经过工程改造的酶,融合了蛋白A(Protein A)和微球菌核酸酶(Micrococcal Nuclease,MNase)的卓越特性,为生命科学研究和生物医学应用开辟了新的道路。 微球菌核酸酶本身是一种能够降解核酸的酶,具有高效、特异性强的特点。而蛋白A则是一种能够与免疫球蛋白G(IgG)特异性结合的蛋白质,广泛应用于抗体纯化等领域。当二者结合形成蛋白AG-微球菌核酸酶时,便实现了功能上的完美互补。在基因编辑技术中,pAG-MNase可以精准地定位到目标核酸序列,像一把锋利的剪刀,将错误或有害的基因片段切断,为后续的基因修复或替换提供便利。它还能在基因表达调控研究中发挥重要作用,通过对染色质的核酸降解,揭示基因转录过程中的关键机制,帮助科学家深入理解基因表达的调控网络。 此外,蛋白AG-微球菌核酸酶在疾病诊断方面也展现出巨大潜力。它可以结合特定的抗体,通过检测核酸的降解产物,实现对病原体的快速、准确检测,为传染病的早期诊断和防控提供有力支持。
SYBR Green qPCR Mix (2×) 以其高灵敏度、特异性、操作简便性和广泛的应用范围
甲基汞凝胶电泳缓冲液(10×)是一种专为甲基氢氧化汞电泳设计的高浓度缓冲液,广泛应用于核酸电泳实验中。它主要由硼酸、硼酸钠和硫酸钠组成,能够为核酸电泳提供稳定的pH环境和良好的导电性。产品特性成分:由500 mM硼酸、50 mM硼酸钠和硫酸钠组成。工作液浓度:稀释10倍后得到的1×工作液含有50 mM硼酸、5 mM硼酸钠和微量硫酸钠,pH值约为8.1。高效分离:适用于甲基氢氧化汞电泳,能够提供清晰的条带。保存条件:室温保存,有效期为12个月。使用方法稀释:将10×甲基汞凝胶电泳缓冲液用蒸馏水或去离子水稀释10倍,制备1×工作液。制备凝胶:将琼脂糖溶解于1×缓冲液中,加热熔化,冷却至55℃后加入甲基氢氧化汞,使其终浓度为5 mM。电泳操作:将样品加入凝胶加样孔中,进行电泳。注意事项水质要求:使用的蒸馏水或去离子水应尽量少含金属离子,以避免影响电泳效果。个人防护:操作时需佩戴实验服和一次性手套,以确保安全。保存条件:室温保存,开封后建议尽快使用。
在模拟污染实验中,UDG防污染系统能够有效降解含尿嘧啶的DNA污染避免了假阳性结果的出现确保了可靠性
FnCas12a(又称Cpf1)是一种由crRNA介导的DNA核酸内切酶,来源于弗朗西斯菌(Francisella tularensis)。作为CRISPR基因编辑系统的重要成员,FnCas12a凭借其独特的工作机制和优势,正在成为基因编辑和核酸检测领域的新宠。 工作原理 FnCas12a通过识别靶标DNA上的PAM序列(通常是TTN)来特异性结合并切割双链DNA,产生粘性末端。与Cas9不同,FnCas12a仅需要单个crRNA作为引导,且切割位点远离识别位点,这使得它在基因组编辑中具有更高的灵活性。此外,FnCas12a在完成顺式切割后,会被激活反式剪切活性,能够进一步切割体系中的任意单链DNA,这一特性被广泛应用于高灵敏度的核酸检测。 独特优势 高效编辑:FnCas12a切割后产生粘性末端,更利于基因组的精确编辑。 灵活性高:其切割位点远离识别位点,为连续多次编辑提供了可能性。 靶向范围广:FnCas12a对PAM序列的要求相对宽松,能够识别更多靶点。 检测灵敏度高:其反式剪切活性可用于快速检测靶标核酸,已被应用于HOLMES核酸快检技术。
其中,750 bp条带的浓度通常较高(约100 ng/5 µL),便于观察和作为参考。
PBCV-1 DNA连接酶(也称为SplintR连接酶或Chorella病毒DNA连接酶)是一种ATP依赖的DNA连接酶,能够高效催化与互补RNA单链配对的两条相邻DNA单链的连接反应。这种酶在连接过程中需要一条互补的RNA链作为“夹板”或“支架”,以固定两条DNA单链,从而实现高效的连接。 工作原理 PBCV-1 DNA连接酶的连接反应依赖于ATP作为能量来源,并且对RNA“夹板”固定的DNA底物具有极高的亲和力(表观Km值为1 nM),这使得它能够在复杂混合物中检测到亚纳摩尔级别的特定RNA。该酶对连接点处的碱基对组合具有一定的耐受性,但某些碱基对组合(如dCG/R或dG/C)可能会抑制酶活性。 应用优势 PBCV-1 DNA连接酶的连接活性远优于传统的T4 DNA连接酶,尤其在高灵敏度RNA检测方面表现出色。它被广泛应用于以下领域: 高灵敏度RNA检测:可用于检测miRNA、mRNA和非编码RNA的定性或定量分析,以及单核苷酸多态性(SNP)和可变剪接的检测。 原位测序:通过连接挂锁探针形成环状模板,用于原位滚环扩增(RCA),从而实现高通量检测。
λ DNA/HindIII酶切产物是琼脂糖凝胶电泳中常用的分子量标准用于快速准确地估算DNA片段大小
Gel-Green是一种新型的荧光核酸染料,旨在替代传统的溴化乙锭(EB),广泛应用于琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳中的DNA和RNA染色。它具有与EB相同的光谱特性,能够在蓝光透射下呈现绿色荧光。产品特性安全性高:Gel-Green是一种油性大分子,不能穿透细胞膜进入细胞内,诱变性远小于EB。灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。稳定性高:具有良好的热稳定性,可在热的琼脂糖溶液中直接添加。信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。 操作简单:与EB用法完全一样,电泳后染色过程只需30分钟且无需脱色或冲洗。使用方法胶染法(推荐方法):制胶时按1:10000比例加入Gel-Green核酸染料(例如:每50 mL琼脂糖溶液中加入5 μL Gel-Green 10,000×储液)。按照常规方法进行电泳。 泡染法:电泳后,将凝胶放入3×染色液中(用0.1 M NaCl溶液将Gel-Green稀释3300倍)。室温振荡染色30分钟。注意事项Gel-Green对玻璃和非聚丙烯材料有一定亲合力,建议在稀释、贮存、染色等过程中使用聚丙烯
它还常用于实时定量PCR(qPCR)中,通过检测荧光强度的变化来定量分析DNA或cDNA的扩增。
4S GelBlue 核酸染料是一种高灵敏度、低毒性、稳定的荧光核酸染色试剂,广泛应用于核酸凝胶电泳实验中。它能够有效替代传统的溴化乙锭(EB)染料,提供更安全、更环保的染色方案。产品特点高灵敏度:4S GelBlue 能够检测低至 20 pg 的核酸条带,灵敏度高于传统染料。低毒性:该染料无法穿透细胞膜,具有极低的细胞毒性和诱变性,使用更加安全。稳定性高:在广泛的 pH 范围(3.0-10.0)和温度条件下保持稳定,适用于多种电泳缓冲系统。信噪比高:荧光信号强,背景信号低,能够提供清晰的电泳条带。操作简便:无需脱色或冲洗,可以直接使用紫外凝胶透射仪或蓝光切胶仪观察。使用方法4S GelBlue 提供两种染色方法:胶染法:在制备琼脂糖凝胶时,将 10000× 的 4S GelBlue 染料稀释至 1× 工作浓度(例如,每 50 mL 琼脂糖溶液中加入 5 μL 染料),混匀后倒入制胶器中。泡染法:电泳完成后,将凝胶浸入 3× 染色液中,室温振荡染色 10-60 分钟,无需脱色。
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