酶-AMP复合物识别DNA末端的5'-磷酸和3'-羟基,将AMP转移到DNA的5'-磷酸末端。
2×miRNA去离子甲酰胺凝胶上样缓冲液是一种专为miRNA电泳设计的试剂,能够有效变性核酸并提供清晰的电泳示踪效果,广泛应用于miRNA的分析和检测。组成成分 该缓冲液的主要成分包括:去离子甲酰胺(Formamide):高浓度的甲酰胺能够有效变性核酸,消除其二级结构,确保miRNA在电泳过程中保持单链状态。溴酚蓝(Bromophenol Blue) 和 二甲苯青(Xylene Cyanol FF):作为示踪染料,帮助观察电泳的进程。EDTA:螯合二价金属离子,防止核酸降解。使用方法样品混合:将miRNA样品与2×去离子甲酰胺凝胶上样缓冲液按1:1比例混合。变性处理:混合后的样品在70℃加热5-10分钟,然后立即置于冰上冷却。电泳上样:将处理后的样品加入尿素-PAGE胶或甲醛变性琼脂糖凝胶的加样孔中,进行电泳。应用场景2×miRNA去离子甲酰胺凝胶上样缓冲液主要用于miRNA的变性电泳,适用于尿素-PAGE胶和甲醛变性琼脂糖凝胶电泳。它能够确保miRNA在电泳过程中保持单链状态,从而获得清晰的电泳条带,便于后续分析。
脱氧腺苷三磷酸(dATP)是DNA合成中的关键核苷酸之一,广泛应用于分子生物学的多种实验中即用型溶液
T7 Endonuclease I(T7EI)是一种来源于T7噬菌体的核酸内切酶,能够特异性识别并切割DNA中的错配碱基对、十字型结构DNA、Holliday结构或交叉DNA以及异源双链DNA。这种酶在基因编辑领域,尤其是CRISPR-Cas9技术中,被广泛用于检测基因突变和编辑效率。 功能与特性 错配识别:T7EI能够识别DNA中的不完全配对碱基对,并在错配位点的5'端切割第一、第二或第三个磷酸二酯键。 高特异性:该酶对特定DNA结构具有高度特异性,能够有效区分野生型和突变型DNA。 应用广泛:除了用于基因编辑效果的检测,T7EI还可用于分解四方向交叉DNA、检测或切割异源双链DNA、随机切割线性DNA进行shot-gun克隆。 在CRISPR基因编辑中的应用 在CRISPR-Cas9基因编辑中,T7EI常用于检测目标基因是否成功引入突变。具体步骤如下: PCR扩增:分别以野生型和突变型DNA为模板,扩增包含突变位点的DNA片段。 变性与退火:将PCR产物变性后退火,形成异源双链DNA。 酶切反应:加入T7EI,在37℃下反应15-30分钟,通过琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果。
Probe qPCR Mix 采用快速反应体系,能够在短时间内完成扩增反应,大大提高了实验速度
在分子生物学实验中,PCR技术是基因扩增的核心工具,而AdvanceFast PCR Master Mix (2×) (With Dye)凭借其快速高效的特性,成为了现代实验室中不可或缺的高效解决方案。 AdvanceFast PCR Master Mix (2×) (With Dye)是一种预配制的高浓度PCR反应体系,专为快速、高效的DNA扩增而设计。其核心成分是一种经过优化的热启动Taq DNA聚合酶,能够在短时间内完成高效的DNA合成。这种酶结合了热启动技术,确保在PCR反应的高温变性步骤中才被激活,从而有效避免非特异性扩增,提高反应的特异性和灵敏度。 该Master Mix的“2×”浓度设计意味着实验人员只需将模板DNA、引物和水加入其中,即可快速配制好反应体系。这种预混液不仅简化了操作流程,还减少了人为误差,确保了反应体系的均一性和稳定性。同时,预混染料的加入使得实验人员可以直接进行凝胶电泳分析,无需额外添加上样缓冲液,进一步提高了实验的便捷性。 AdvanceFast PCR Master Mix (2×) (With Dye)的另一个显著特点是其优化的反应条件。
Taq PCR Master Mix (2×) (With Dye)广泛应用于基因克隆、基因表达分析
T4 Gene 32 Protein(gp32)是一种单链DNA(ssDNA)结合蛋白,来源于T4噬菌体,广泛应用于分子生物学实验中。它在T4噬菌体的DNA复制、重组和修复过程中发挥关键作用。功能与特性稳定ssDNA:gp32能够特异性结合ssDNA,防止其重新退火或被核酸酶降解,从而保护ssDNA的完整性。促进DNA代谢:通过与ssDNA结合,gp32为多种DNA代谢相关蛋白(如DNA聚合酶、限制性内切酶等)提供结合位点,促进其功能。结构域功能:gp32由三个结构域组成,其中C端结构域在调节ssDNA结合和与其他蛋白的相互作用中起关键作用。应用场景电子显微镜观察:用于稳定和标记ssDNA区域,便于通过电子显微镜观察细胞内DNA的结构。提高RT-PCR效率:在RT-PCR中,gp32能够增加反转录酶的产量和过程性,从而提高反应效率。增强PCR产物产量:在PCR反应中,gp32能够提高产物的产量和特异性,特别是在处理复杂样本(如土壤样本)时,可有效降低抑制物的影响。重组酶聚合酶扩增(RPA):在RPA反应中,gp32能够显著提高扩增效率,适用于快速、等温的核酸检测。
它能够在高盐环境下保持高效活性,尤其在500 mM NaCl条件下表现出最佳活性。
GoldenView II 吖啶橙核酸染料是一种新型的荧光染料,专为琼脂糖凝胶电泳设计,可替代传统的溴化乙锭(EB)。它结合了吖啶橙的荧光特性,具有更高的灵敏度和安全性。产品特性GoldenView II 吖啶橙核酸染料与核酸结合后能产生很强的荧光信号,其灵敏度比EB强5-10倍。它在与双链DNA结合时发出绿色荧光,与单链RNA结合时发出橙色荧光,激发波长为488 nm,发射波长分别为530 nm(绿色)和640 nm(橙色)。使用方法GoldenView II 的使用方法与EB相同,适用于琼脂糖凝胶电泳。在电泳前,将染料稀释至工作浓度(通常为1×),加入凝胶溶液中,轻轻摇匀后倒胶。电泳结束后,使用紫外灯或蓝光灯观察荧光条带。安全性与EB相比,GoldenView II 更安全,具有更低的诱变性和毒性。它在世界卫生组织国际癌症研究机构的致癌物清单中属于3类致癌物,使用时仍需注意防护。应用范围GoldenView II 不仅适用于琼脂糖凝胶电泳,还可用于细胞染色。它能够透过细胞膜,使细胞核中的DNA和RNA染色,在荧光显微镜下可观察到细胞周期状态。
因此,该缓冲液不仅适用于常规的DNA电泳,还特别适合用于终止酶促反应后的样品分析。
SYBR Green I是一种高灵敏度的荧光染料,广泛应用于核酸电泳和定量PCR等领域。其10000×浓缩液形式为实验操作提供了极大的便利,能够显著提高核酸检测的效率和灵敏度。产品特性SYBR Green I与双链DNA(dsDNA)结合后,荧光强度可增强1000倍,其检测灵敏度是传统溴化乙锭(EB)的25-100倍。这种染料在紫外光或可见光下均能发出明亮的绿色荧光,背景信号低,信噪比高,能够清晰地显示核酸条带。应用范围SYBR Green I适用于多种核酸分析方法,包括琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳。此外,它还常用于实时定量PCR(qPCR)中,通过检测荧光强度的变化来定量分析DNA或cDNA的扩增。使用方法 SYBR Green I可以采用预染或后染的方法进行核酸染色。预染时,将10000×的SYBR Green I稀释100倍,加入样品中室温孵育10分钟后再进行电泳。后染时,将电泳后的凝胶浸泡在稀释后的染色液中,室温振荡染色10-30分钟。在qPCR中,SYBR Green I通常以0.2×到1×的终浓度加入反应体系中。
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